Abstrakt
Wprowadzenie
Testy transformacji korzenia włośnikowatego (HR) z udziałem Agrobacterium rhizogenes, zarówno in vitro, jak i ex vitro, stanowią niezbędne narzędzia w biotechnologii roślin i genomice funkcjonalnej. Na wyniki tych testów mogą znacząco wpływać różne czynniki, co ostatecznie może zwiększyć ich wydajność. W niniejszym badaniu zoptymalizowaliśmy dwuetapową metodę transformacji HR ex vitro, wykorzystując rzeczywistą roślinę mateczną w połączeniu z systemem RUBY, i porównaliśmy ją z istniejącymi metodami.
Wyniki
Dwuetapowa metoda ex vitro okazała się bardziej wydajna niż jednoetapowa metoda ex vitro i in vitro, osiągając najwyższą wydajność transformacji, wynoszącą 90%, zaobserwowaną w rzeczywistej roślinie. Technika ta okazała się również szybszym i mniej skomplikowanym podejściem, skracając czas uzyskania masywnego transgenicznego HR o 9–29 dni w porównaniu z innymi metodami.
Wnioski
Opracowano nową, szybszą, mniej skomplikowaną i bardziej wydajną dwuetapową metodę transformacji konopi, która wiąże się ze znacznie niższym ryzykiem zanieczyszczenia. Ten protokół jest szczególnie interesujący w kontekście produkcji metabolitów wtórnych z wykorzystaniem systemu CRISPR/Cas w konopiach. Przewidujemy, że ta metoda pozwoli na znaczną oszczędność czasu dzięki szybkiemu wytwarzaniu setek przetworzonych próbek.
